催产激素对尼罗罗非鱼人工繁殖效果的研究
催产激素对尼罗罗非鱼人工繁殖效果的研究
魏继海,赵永华,王燕,岳蒙蒙,赵金良*
(上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306)
根据催产激素注射后前期血清类固醇激素的水平变化,筛选了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)最佳催产激素组合。为了进一步验证该催产激素组合的生产效果,在尼罗罗非鱼繁殖生产期间进行人工催产试验,观察催产后144h内实际含卵雌鱼比例与催产效应时间,并从卵子形态变化方面观察催产效应。结果显示:水温21~29℃时,催产试验组平均获产率为57.5%,对照组平均获产率为27.5%,试验组的平均获产率显著高于对照组(P<0.05);试验组含卵时间集中在72h内,对照组含卵时间比较分散;催产后72h,试验组50%雌鱼卵子发育达到成熟期,对照组仅30%。试验结果为尼罗罗非鱼全人工繁殖生产提供了参考依据。
尼罗罗非鱼;人工催产;催产激素;获产率
尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)原产于非洲,具有生长快、养殖周期短、群体繁殖能力高、适应性强等特点,目前已成为我国重要的淡水养殖鱼类之一[1]。尼罗罗非鱼是一年多次产卵型鱼类,性腺发育非同步性,自然繁殖容易[2],但人工繁殖比较困难,主要是很难获得成熟卵,这也影响了罗非鱼相关研究工作的深入开展[3-4]。目前,国内外对罗非鱼催产激素种类研究较少[5-7],李建平等[8]对奥利亚罗非鱼(O.aureus)进行了人工繁殖试验,催产激素为DOM和LRH-A2,雌鱼催产剂量为4mg/kgDOM+6ug/kgLRH-A2时,获产率为62.5%。李瑞伟等[9]对吉富罗非鱼(O.niloticus)进行了人工催产试验,认为3 000IU/kgHCG+15ug/kgLRH-A2+9mg/kgDOM的催产效果最佳,获产率达66%左右。Fernandes等[10]比较了几种单一催产激素(PE、HCG、GnRH)对尼罗罗非鱼卵母细胞成熟与排卵效果,发现HCG诱导效果最佳,剂量为1 000~5 000IU/kg时,均能产生有效诱导。在此基础上,本试验室根据催产后血清类固醇激素(GnRH、GTH、E2、P)水平变化特征,筛选了尼罗罗非鱼的最佳催产激素组合及剂量[11],并在尼罗罗非鱼繁殖生产期开展催产激素注射试验,评估混合催产激素对尼罗罗非鱼繁殖产卵的影响,验证其实际生产效果,以期为尼罗罗非鱼人工繁殖技术与应用积累资料。
1 材料与方法
1.1试验材料
尼罗罗非鱼亲鱼取自上海海洋大学罗非鱼种质资源试验站,1龄,体重为140~300g。催产时间为2015年5月30日—7月19日,每隔15天左右进行一次催产试验,共进行4次。催产前,通过挤卵、精子观察法,挑选性腺发育较好的雌、雄鱼各20尾,按雌雄比1:1分别放养在两个2m×2m×1.5m网箱中,每个网箱10组亲鱼。试验期间水温为21~29℃,pH为6.3~7.6,日投饵量为鱼体重的5%左右。促黄体素释放激素A2(LRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、地欧酮(DOM)均购自于宁波第二激素厂。
1.2试验方法
1.2.1获产率试验
试验分成试验组和对照组,采用一次注射法,胸鳍基部注射;试验组注射催产激素剂量为9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG,每尾雌鱼的注射量控制在1mL左右,雄鱼不注射;对照组注射相同剂量的生理盐水。催产后72h第一次检测含卵雌鱼个数,之后每隔24h检测1次,144h为最后一次检测。
1.2.2卵子形态发育观察
7月20日,挑选雌鱼10尾进行催产,另挑选10尾作为对照组注射相同剂量的生理盐水,试验组和对照组均无雄鱼。催产前(0h)及催产后72h,每隔24 小时用人工方法挤出少量卵子保存于0.7%生理盐水中,用OLYMPUS-SZX7解剖镜观察拍照。
2 结果与分析
2.1催产效果
从5月30日到7月19日进行的4个批次催产结果见表1。试验组4次催产后的雌鱼获产率分别为60%、60%、60%、50%,对照组获产率为30%、20%、30%、30%。试验组平均获产率显著高于对照组(P<0.05)。试验组产卵时间多在72h内完成,对照组产卵时间、范围较分散。
表1 激素催产后尼罗罗非鱼雌鱼含卵尾数
2.2卵子的质量鉴别
催产前、后通过人工挤卵获得的卵子形态见图1。未成熟卵子表面有少量血丝,卵黄较为明显、充满,长径为1.7~2.4mm,短径为0.5~1.8mm;成熟卵子呈鸭梨形、黄褐色,卵黄颗粒大而饱满,长径为1.8~2.7mm,短径为0.6~1.8mm;过熟卵子呈椭圆形,或不规则,卵黄颗粒液化,卵径减小,动、植物极两端变白,表层布满黑色斑点,轻碰卵子即破裂。
催产后各时间点成熟雌鱼情况见表2。催产后72h时,试验组有4尾雌鱼卵子发育成熟或过熟,对照组有2尾雌鱼成熟或过熟。催产后96h,对照组有1尾雌鱼成熟。催产后120h,试验组有1尾雌鱼成熟;144h,试验组、对照组均无成熟期雌鱼。
注:①未成熟卵,②成熟卵,③过熟卵。
Notes:①immatureeggs,②matureeggs,③overripeeggs.
表2 催产后各时间点尼罗罗非鱼成熟发育
3 讨论
早期开展的鱼类人工繁殖研究试验中,多数学者使用单一人工催产激素进行人工催产试验研究,如鲤鱼垂体[12]、HCG[13]、GnRH以及GnRHa[14]。由于罗非鱼性腺发育的特殊性,对人工催产激素具有不敏感性,单一催产激素、低剂量均对罗非鱼人工繁殖未能产生明显效果。本研究利用前期筛选出的催产激素种类及剂量9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG,在实际生产中对尼罗罗非鱼进行了催产试验,试验组平均获产率达57.5%,对照组平均获产率27.5%;试验组含卵时间集中在72h内完成,对照组含卵时间无明显集中时间,说明DOM+LRH-A2+HCG激素组合对尼罗罗非鱼产卵产生了较明显的影响,能有效提高尼罗罗非鱼获产率。尼罗罗非鱼属于一年多次产卵型鱼类,性腺发育不同步,催产效率明显低于同步产卵型鱼类,而且效应时间也大于同步产卵型鱼类,如“四大家鱼”等获产率都能达到90%以上,效应时间一般在10~28h之间。本试验中,催产组的实际获产率也低于之前的奥利亚罗非鱼、吉富罗非鱼催产试验结果[8-9],奥利亚罗非鱼催产亲本体重为150~750g,实际年龄组为1~3龄,吉富罗非鱼人工催产试验中水温条件达27~30℃,因此,罗非鱼人工催产时间效率还受种间差异、亲鱼年龄、性腺发育、试验水温等因素的共同影响。
催产前的卵子表面有少量血丝,卵黄几乎充满细胞质,属于未成熟期。催产后,卵子呈鸭梨状,卵黄充满整个细胞质,卵径达到最大,为卵细胞的成熟期[15]。随时间推移,部分卵细胞动、植物极开始变白,卵径减小,处于过熟期;之后,卵子呈不规则形状、白色,卵黄开始液化,表层出现黑色斑点。本试验中,催产后72h,试验组40%的雌鱼达到或超过成熟期,对照组20%雌鱼达到或超过成熟期;催产后96~120h,试验组、对照组各有10%雌鱼发育成熟,这与实际催产试验中雌鱼含卵比例与含卵时间的结果基本一致,从卵子形态发育角度验证了催产试验效果。
由于尼罗罗非鱼个体性腺发育不同步性,催产前,应对雌鱼进行严格挑选,这也是催产试验的关键步骤。催产过程中,要轻拿轻放,防止亲鱼受强烈刺激后产生较大应激反应,影响催产效果。
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