中华大蟾蜍（Bufo gargarizans gargarizans）俗称癞蛤蟆，隶属于两栖纲（Amphibia）无尾目（Anura）蟾蜍科（Bufonidae）蟾蜍属（Bufo）。在我国东北、华北、华东、华中、西北、西南等省区均有分布，国外分布在俄罗斯、朝鲜[1]。蟾蜍不但是农作物、牧草和森林害虫的天敌，而且是动物药蟾酥的药源[2-3]。蟾酥是我国传统名贵中药材，是中华大蟾蜍耳后腺分泌浆液经干燥加工后制成。蟾酥所含成分复杂，通过对蟾酥的分离鉴定，已确定的化学成分主要包含蟾蜍毒素类、甾醇类、蟾毒色胺类、氨基酸、有机酸等[4]。现代药理学研究表明，蟾酥具有抑制肿瘤细胞、强心、抗心肌缺血、升压、局部麻醉、镇痛、抗炎等作用，且在临床上应用广泛[5]。由于环境破坏和不合理利用，中华大蟾蜍的野生资源日益枯竭，开展规范化人工养殖才能满足日益增长的市场需求[6]。

当前，蟾酥市场缺口大，经济价值高，而中华大蟾蜍的人工养殖技术仍未成熟，现有的蟾蜍养殖户多以探索性为主，养殖效益较低、规模小。研究学者已经对中华大蟾蜍及其蝌蚪的食性[7]、变态与发育[8]、养殖密度[9]、蟾蜍耳后腺分子生物学、组织学和超微结构[10]及蟾蜍适宜的生态环境[11]等方面进行了大量的基础性研究。而对中华大蟾蜍养殖模式、养殖病害防治、人工育种、人工配合饲料和投喂模式等研究较少。

摄食节律是动物不同时间内摄食强度变化的规律，是动物在长期进化过程中对光周期、温度、饵料丰度等周期性变化主动适应的结果。科学投喂模式的建立要以养殖动物自身的摄食节律为基础[12]。中华大蟾蜍的摄食节律研究有利于调整养殖蟾蜍投喂时间和投喂量，减少饲料浪费，提高饵料利用率。龚双姣等[13]研究了中华大蟾蜍蝌蚪阶段（孵出后54日龄）的摄食节律，而中华大蟾蜍幼蟾阶段摄食节律的研究尚未见报道。本研究观察中华大蟾蜍幼蟾在不同投喂频率下的摄食情况，总结其摄食节律，为中华大蟾蜍幼蟾养殖最佳投喂模式的确定提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验条件

试验在塑料养殖盒中进行，塑料养殖箱规格为长、宽、高70 cm×40 cm×20 cm，将养殖箱倾斜放于地面，箱底与地面呈15°夹角，养殖箱内注入曝气自来水，水面占箱底面积的1/3，水深5 cm。在水中铺设空心莲子草和瓦片，便于幼蟾栖息隐蔽。试验期间，每天更换一次水体，每次更换水体的1/2左右。水温维持在23.2～24.1℃，环境湿度保持在60%～80%，氨氮浓度低于0.1 mg/L，pH 7.0～7.6。试验在12 h白天、12 h夜晚的自然光周期下进行。塑料养殖箱放置于光照良好、通风和安静的室内实验室中。

1.2 蟾蜍

所用幼蟾为山东中华大蟾蜍蝌蚪经人工饲养变态得到的个体。试验前7 d选取规格基本一致，体重为0.6～1.0 g的健康幼蟾，每个养殖箱随机放10只幼蟾，在相同环境下饲养驯化7 d后，开始试验。

1.3 试验设计

试验设计了每日不同时间点8次投喂（组1）和每日不同时间点1次投喂（组2）2个组别，组1是 每 天 在05:00、08:00、11:00、14:00、17:00、20:00、23:00、02:00 8个时间点对幼蟾定量投喂适口的黄粉虫，2.5 h后收集残饵称重，每个养殖箱每天投喂8次，设3个重复组，共3个养殖箱；组2是在与组1相同的8个时间点对幼蟾投喂适口的黄粉虫，2.5 h后收集残饵称重，每个养殖箱每天投喂1次，设3个重复组，每个重复组8个养殖箱，共24个养殖箱。试验开始前停食1 d并称量每个重复组幼蟾的初始总体重，每次投喂各重复组幼蟾总体重10%的黄粉虫。试验连续进行7 d，试验结束后停食1 d并称取每个重复组幼蟾终末总体重。取后5 d数据统计分析。

1.4 数据处理与统计分析

使用摄食率作为评估摄食节律的指标，其计算公式按照杨瑞斌等[14]所提供的方法进行处理。

运用Excel 2019进行数据处理，利用SPSS 22软件进行统计分析。不同时间点的摄食率经单因素方差分析（ANOVA），进行多重比较，评估各时间点摄食率的差异显著性情况。使用t检验比较分析2种投喂处理下相同时段摄食率的差异性。

2 结果与分析

2.1 日投喂 8 次条件下的摄食节律

摄食率是指摄食的饵料占动物体重的百分比，在生产中，通常使用摄食率来衡量动物的摄食情况。试验过程中，幼蟾的活动正常，没有死亡发生。如图1所示，一日8次组幼蟾全天在不同时段均有摄食，并且在一天的摄食中呈现出明显的节律性。日投喂8次条件下的试验结果表明，08:00幼蟾摄食率比其他各时段摄食率高，与除17:00、20:00时段外的其他时段存在显著差异性（P＜0.05），17:00时段幼蟾摄食率比除08:00时段以外的其他组高，且与各时段差异均不显著（P＞0.05），幼蟾在08:00和17:00出现摄食高峰，其余时间点摄食量较少；经多重比较发现，幼蟾在夜晚投喂时段摄食率之和与白天投喂时段摄食率之和相比明显较高。日投喂8次条件下，中华大蟾蜍幼蟾的单次摄食率为0.65%～5.75%，日平均摄食率为（15.22±0.56）%。本研究结果表明，在饵料丰盈时中华大蟾蜍幼蟾的摄食强度高，在饵料丰盈的条件下更趋向于早晨和傍晚摄食，这与其自然状况下的生活习性是密不可分的，属于比较典型的晨昏摄食型。

2.2 日投喂 1次条件下的摄食节律

图1 所示一日1次组，中华大蟾蜍幼蟾在一天中的不同时间点均有摄食活动，02:00和23:00投喂时段幼蟾摄食率比其他时段组摄食率低，与05:00、08:00、11:00、17:00时间段存在显著差异（P＜0.05），08:00时段幼蟾摄食率比20:00摄食率高，但差异不显著（P＞0.05），幼蟾在05:00、08:00、17:00出现摄食高峰，其他时间点摄食率较低，但在02：00摄食率最低。日（次）摄食率为3.24%～8.83%，日平均摄食率为（6.09±0.26）%，与一日8次投喂频率时的日平均摄食率相比较低。本试验结果说明，饵料丰富程度对中华大蟾蜍幼蟾的摄食节律产生了影响，同时肠胃容量、肠胃排空时间、肠胃消化率等因素会对幼蟾摄食量产生影响。

2.3 2种投喂处理下同一时段的摄食率比较

如图1所示，一日1次投喂频率时，幼蟾每一时段的摄食率与一日8次投喂频率条件下，同一时段的摄食率相比，日投喂1次幼蟾摄食率明显较高，经过t检验后，结果表明，2种不同投喂处理下相同时段的摄食率差异显著（P＜0.05），摄食率能够反映幼蟾的摄食情况，说明中华大蟾蜍幼蟾的摄食是受饵料丰度和肠胃容量双重因素的影响。

图1 不同投喂条件下中华大蟾蜍幼蟾的摄食节律

3 结论与讨论

3.1 中华大蟾蜍幼蟾的摄食节律分析

本研究采用日摄食率法，探讨了中华大蟾蜍幼蟾在一日1次投喂频率和一日8次投喂频率下的摄食节律。结果表明，幼蟾全天不同时段都有摄食，并且表现出明显的节律性。摄食主要集中在05:00～08:00以及17:00左右，而在11:00～14:00和23:00～02:00，摄食处于低迷状态，这与中华大蟾蜍蝌蚪摄食节律有相似趋势[13]。在泰国虎纹蛙的规模化养殖中，饲料的投喂主要在06:00～07:00时和17:00～18:00[15]。在自然界内，野生蟾蜍的摄食活动主要集中在傍晚和清晨[16]，与本试验结论相似。多数动物的摄食活动都有明显的日周期变化规律，根据动物的摄食规律，可以将动物摄食节律分为白天摄食、晚上摄食、晨昏摄食和无明显节律型[17]。本试验结果表明，中华大蟾蜍幼蟾的摄食节律属于晨昏摄食型。

结果表明，中华大蟾蜍幼蟾的摄食受饵料丰度和胃充塞度的影响，在相同的摄食时间，一日1次组的单次摄食率都显著高于一日8次组的单次摄食率，而一日8次组的日摄食率显著高于一日1次组的日摄食率。动物的摄食节律是长期进化而来的内源性节律，受光照、温度、饵料丰度及不同发育时期等因素的影响[18-20]。李鹄鸣等[21]报道了水温升高时棘胸蛙蝌蚪和牛蛙蝌蚪食量增加。蟾蜍在秋季时摄食量增大，为冬眠补足营养[16]。本试验2种投喂模式下，相同时间段幼蟾的摄食率差异显著，但是总体仍然呈现出晨昏摄食的规律。

3.2 中华大蟾蜍幼蟾投喂模式分析

投喂模式是由投饲量、投饲时间、投饲频率、投饲模型等环节相互关联组成的有机整体，是集约化养殖管理的核心之一，以获得最优生长速率、最小饲料浪费和最低水质污染为目标[18]。以养殖动物内源性摄食节律为生物学基础，确定最佳投喂时间、最适投喂量，有利于提高动物的饲料利用率，适宜的投喂时间应该避免摄食低谷，选择在动物摄食高峰阶段[22]。根据本研究结果，幼蟾在早晨和黄昏时段摄食率要显著高于其他时段，因此每天可以分别在早晨和傍晚对幼蟾进行投喂，投喂频率2次/d。根据本试验结果，幼蟾的日平均摄食率约为15%，根据之前的养殖经验来看，每天对幼蟾投喂幼蟾体重10%的黄粉虫即可获得较好的养殖效果，幼蟾对黄粉虫的消化较好，而按15%投喂时，粪便中存在较多未完全消化的黄粉虫，因此每天早晚各投喂1次，每次的投喂量应在5%左右。蟾蜍的摄食受温度、季节、生长阶段的影响[16]。投喂量能显著影响养殖动物的生长，需要根据蟾蜍的最高生长率和最低饲料系数来综合评定最适投喂量[12]，因此，养殖蟾蜍各阶段的最适投喂量需要进一步的研究探讨。