四倍体长牡蛎的生产方法与生物学特性

于瑞海，李海昆，李春华，邹多

(中国海洋大学水产学院，山东 青岛266003)

由于三倍体牡蛎具有育性差、生长快、死亡率低的优点，三倍体牡蛎的养殖面积逐年增加，成为北方牡蛎养殖的热点之一。目前养殖的三倍体牡蛎主要是采用二倍体牡蛎卵子与四倍体牡蛎精子杂交产生的。当前限制三倍体牡蛎苗种生产的瓶颈主要是四倍体牡蛎的供应。四倍体牡蛎是一个特殊群体，跟普通的二倍体牡蛎不同，自然界没有野生存活的四倍体存在，都是由三倍体长牡蛎人工诱导而来的。

四倍体牡蛎是指细胞中含有四套染色体组的牡蛎，即4n；正常二倍体是含有2套染色体组，即2n。目前牡蛎的多倍体育种主要是三倍体和四倍体育种，生产上广泛应用的是三倍体牡蛎和四倍体牡蛎。国内外对三倍体牡蛎研究较多，现主要就四倍体长牡蛎的生物学特性和未来的发展方向进行介绍和探讨。

一、四倍体长牡蛎的生产方法

四倍体长牡蛎是由三倍体长牡蛎成熟的卵子与二倍体长牡蛎精子杂交，通过多种理化方法抑制杂交受精卵极体排放产生的。郭希明等(1994)首先报道了一种贝类四倍体生产技术，王昭萍等(2003)首次培育出存活四倍体长牡蛎，而诱导四倍体牡蛎的药物主要是细胞松弛素B(简称CB)和6-二甲基氨基嘌呤(简称6-DMAP)。

成熟的三倍体牡蛎产卵量较少，成熟度较差。三倍体牡蛎产生的卵子与二倍体精子杂交，利用药物处理抑制杂交受精卵的极体排放后会产生大量不同倍性的个体，而其中的非整倍体幼虫大部分是不能存活下来的，所以诱导组幼虫的存活率通常较低。处理时机掌握、处理时间以及药物诱导毒性作用对诱导四倍体牡蛎的孵化率、幼虫成活率都有一定影响，也会影响四倍体诱导率，因此，最后能够存活下来的幼虫较少。这也是目前四倍体长牡蛎群体紧缺的主要因素之一。

二、四倍体长牡蛎养殖生物学特性

与二倍体长牡蛎比较，四倍体长牡蛎主要表现如下特征。

1.可以自繁培育下一代，也可在自然或人工促熟条件下产卵、排精，再采用人工授精法繁殖后代。四倍体卵径为63.68微米，明显大于二倍体(平均卵径49.35微米)。精子大小上4n精子比2n精子大30%左右。四倍体长牡蛎D形幼虫大小为89微米，明显大于二倍体长牡蛎。

2.与二倍体组生长比较，四倍体自繁组幼虫具有一定生长优势，比二倍体组早5～6天出现眼点。但在稚贝、幼贝及成贝阶段没有生长优势，处于生长劣势，同月龄比二倍体组个体小，差异显著。

3.四倍体长牡蛎精子可与二倍体长牡蛎卵子受精杂交生产100%的三倍体长牡蛎，为三倍体长牡蛎规模化生产提供保证，这是四倍体长牡蛎最大的价值之一。

4.四倍体长牡蛎自繁后代会出现染色体丢失的问题，因此，后代倍性极不稳定，随着生长时间的延长，染色体不断缺失，大部分衰退变成三倍体、二倍体及非整倍体，只有小部分四倍体存在，这是其最大缺点之一。

因此，四倍体长牡蛎需要不断进行诱导培育，由于诱导难度较大，造成四倍体长牡蛎不能满足生产需求，而没有足量的四倍体长牡蛎直接导致三倍体长牡蛎苗种供应紧张。

三、四倍体长牡蛎发展趋势

根据四倍体长牡蛎生长性状和发展特点，可进行如下工作，以保证四倍体长牡蛎种群稳定发展，从而保证三倍体长牡蛎产业健康可持续发展。

1.完善四倍体长牡蛎诱导技术工艺，包括三倍体亲贝促熟培养、诱导时机、诱导时间、药物浓度和诱导幼虫的培育等。四倍体长牡蛎诱导组幼虫培育技术要进行优化和完善，提高四倍体长牡蛎的诱导率以及四倍体长牡蛎幼虫成活率，从而保证能培育出一定量的四倍体群体。

2.研究培育染色体稳定四倍体群体技术，培育性状稳定的四倍体家系，通过四倍体长牡蛎群体选育和家系选育，经过多年连续筛选，获得四倍体倍性相对稳定家系，以减少四倍体长牡蛎诱导过程。

3.加强四倍体倍性检测力度，保证四倍体长牡蛎真实性。四倍体长牡蛎的生产应用和实验前都要进行倍性检测，保证使用的四倍体长牡蛎都是真正的四倍体。对于养殖的四倍体群体也要定期进行倍性检测，以便及时掌握四倍体长牡蛎群体的倍性变化情况，比较准确了解四倍体长牡蛎具体数量。

4.要完善利用四倍体长牡蛎生产全三倍体牡蛎生产工艺。三倍体长牡蛎育苗生产时，首先要保证使用的四倍体长牡蛎为真正的四倍体；其次是要有严格的二倍体解剖技术及雌雄挑选技术，确保挑出百分百的雌贝，之后取卵、浸泡促熟，镜检有无二倍体精子污染，发现污染立即舍弃，重新解剖取卵。人工授精时，把握好四倍体精子和二倍体卵子的配比，在最大限度利用四倍体精子的同时尽可能提高受精率。孵化过程中要降低孵化密度，最大限度提高孵化率。三倍体幼虫培育期间也要严格管理和操作，定期进行倍性检测，以保证三倍体长牡蛎苗培育成功，为养殖户提供优质三倍体苗种。