丁香酚对锦鲤幼鱼的麻醉作用

杨志强，李潇轩，李志辉，尹陆乐，朱 天，陈建清，韩 飞，潘建林

(江苏省淡水水产研究所，江苏 南京 210017)

锦鲤(Cryprinuscarpiod)是风靡世界的高档观赏鱼，有“水中活宝石” “会游泳的艺术品”之称[1]，因其杂食性、易于饲养和繁殖，而受到人们的广泛欢迎。锦鲤在人为操作和运输过程中由于活动敏捷、喜跳跃，伴随剧烈挣扎，极易导致其掉鳞、受伤、充血。但如果采用麻醉剂进行相应的处理，其合理使用不仅能够减轻锦鲤应激反应，减少鱼体损伤，而且能降低死亡率[2-3]。

用于鱼类的麻醉剂有近30种，包括丁香酚、MS-222、美托味酯、喹哪啶、CO2等[4]。丁香酚本质为植物香料，作为麻醉剂能从机体组织和血液中快速排出，不会影响人体健康，也不会诱发机体突变[5]。目前，丁香酚被广泛应用于医学领域，常作为牙科镇痛剂。由于丁香酚没有残留期、液体制剂在淡水和海水中均易于溶解，且价廉易得，大多数国家都认可丁香酚是一种合法的水产麻醉剂，并广泛应用于生产应用和试验研究，例如活鱼运输、活体手术以及亲鱼采卵等[6-12]，美国食品药品监督管理局也批准其用于麻醉食用鱼[13]。目前，关于丁香酚的麻醉效果，国内外学者主要对大黄鱼(Larimichthyscrocea)[7]、倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)[14]、罗非鱼(Oreochromisspp)[15]、半滑舌鳎(CynoglossussemilaevisGunther)[11]、中国对虾(Fenneropenaeuschinensis)[16]等水产动物进行了研究，而有关丁香酚对锦鲤麻醉效果的研究仅见张志明等[17]和李春梅等[18]的报道。

本研究采用不同浓度的丁香酚对锦鲤幼鱼进行麻醉试验，通过观察锦鲤幼鱼在不同麻醉条件下的行为反应，旨在找出适合于锦鲤长途运输及人工操作的适宜质量浓度范围，以期为丁香酚应用于锦鲤麻醉提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验时间：2018年5月15—16日。试验地点：江苏省淡水水产研究所禄口基地。试验用鱼：当年春季基地人工繁育所得，挑选规格均匀、体质良好、健康无病的锦鲤幼鱼，体长为(14.16±0.98)cm，体质量为(40.50±1.04)g，试验前停食1 d。试验装置：试验全程室内进行，10 L左右的白色塑料箱。试验用水：自来水曝气24 h，水体溶解氧>5.0 mg/L，pH值为(7.7±0.1)，温度为(19.5±0.5)℃。

丁香酚为丁香油的主要成分，学名：1-羟基-2-甲氧基-4-烯丙基苯，分子式：C11H12O2，液体呈淡黄色，易溶于醚、冰醋酸及醇，难溶于水。其购自成都化夏化学试剂有限公司，为分析纯，有效成分≥95%，使用时按V(丁香酚)∶V(酒精)=1∶8溶解于酒精后，静置10 min使用。

1.2 试验方法

在本试验设计中，共设计7个丁香酚浓度水平(0、10、20、30、40、60、100 mg/L)，每个浓度组10尾鱼。麻醉时不增氧，麻醉剂加入后均匀搅动，室内常温。其中，对照组即0 mg/L丁香酚浓度组不加入酒精。观察不同丁香酚浓度水平麻醉锦鲤幼鱼的效果及其行为反应，分别记录其进入不同麻醉分期(A1期：镇静期、A2期：轻度麻醉期、A3期：中度麻醉期、A4期：深度麻醉期)及麻醉后的锦鲤幼鱼转入清水中进入R4期(正常期)所需要的时间。若转入清水中24 h后麻醉鱼仍不苏醒，则判定为死亡，记录能够完全复苏的麻醉鱼尾数。

1.3 数据处理

数据分析使用Excel 2013。

复苏率的计算公式：复苏率=能够完全复苏的麻醉鱼尾数/试验鱼总数×100%。

2 结果与分析

2.1 锦鲤幼鱼在不同浓度丁香酚中的行为反应

参考梁政远等[19]和张志明等[17]的报道，鱼类麻醉及复苏分期行为体征见表1。观察麻醉锦鲤幼鱼的行为反应，发现锦鲤幼鱼在不同的丁香酚水溶液中能经历的镇静期、轻度麻醉期、中度麻醉期以及深度麻醉期不一。10 mg/L丁香酚浓度组锦鲤幼鱼仅能进入镇静期，镇静期锦鲤幼鱼表现为对外界刺激反应明显，鳃盖张合频率正常，游速正常。20 mg/L丁香酚浓度组锦鲤幼鱼仅能进入镇静期、轻度麻醉期，轻度麻醉期锦鲤幼鱼表现为对外界刺激反应迟缓，游速减慢，行为迟钝。30、40、60和100 mg/L丁香酚浓度组锦鲤幼鱼均能进入不同麻醉分期(镇静期、轻度麻醉期、中度麻醉期、深度麻醉期)，中度麻醉期锦鲤幼鱼表现为完全失去反应能力，出现怪异泳状直至游动停止，浮在水面；深度麻醉期锦鲤幼鱼表现为鳃盖张合频率降低直至停止，呼吸微弱或停止，鱼体逐渐失去平衡，沉入底部。

表1 鱼类麻醉及复苏分期行为体征

续表1

注：A0.正常期；A1.镇静期；A2.轻度麻醉期；A3.中度麻醉期；A4.深度麻醉期；R1.鳃动期；R2.抖动期；R3.游动期；R4.正常期。

Notes：A0.Normal period；A1.Sedation period；A2.Mild anesthesia period；A3.Moderate anesthesia period；A4.Deep anesthesia period；R1.Gill moving period；R2.Jitter period；R3.Swimming period；R4.Normal period.

2.2 锦鲤幼鱼的麻醉时间和苏醒时间

锦鲤幼鱼在各丁香酚浓度组进入不同麻醉分期的时间和麻醉后苏醒时间以及锦鲤幼鱼的复苏率见表2。由表2可以看出，随着丁香酚浓度的逐渐升高，锦鲤幼鱼表现出进入各麻醉分期所需时间逐渐减少，而后所需苏醒时间逐渐增加；0、10、20、30、40和60 mg/L丁香酚浓度组锦鲤幼鱼复苏率均达到100%，而100 mg/L浓度组锦鲤幼鱼出现死亡，复苏率为90%。

表2 不同浓度丁香酚对锦鲤幼鱼的麻醉效果

注：*表示不能进入麻醉状态，—表示此期特征不明显。

Notes：* indicated fishes couldn’t enter anesthesia，— indicated the characteristics in the period were not obvious.

3 小结与讨论

3.1 丁香酚对锦鲤幼鱼的麻醉效果

麻醉剂通过抑制鱼类的反射能力和活动能力导致鱼类排泄物减少、鳃盖张合频率减缓及游动迟缓，其作用通径为鱼体表及鱼鳃吸收麻醉剂并传导至神经中枢，如果麻醉剂的用量超过一定范围，鱼类长时间处于中度麻醉期或深度麻醉期，则会造成死亡[20]。由于物种之间的差异，丁香酚麻醉不同鱼类的效果也存在差异。丁香酚作为大多数鱼类的首选麻醉剂，其在观赏鱼研究应用方面则较少。本试验中，在不同麻醉分期锦鲤幼鱼均不同程度表现出鳃盖张合频率减缓、游动迟缓等行为。丁香酚浓度≤10 mg/L时麻醉锦鲤幼鱼无效；浓度为20 mg/L时需要8.79 min可进入轻度麻醉期；浓度≥30 mg/L时可进入中度麻醉期及深度麻醉期；浓度为100 mg/L时，未能完全复苏，分析原因可能是鱼体表及鱼鳃吸收过量丁香酚，呼吸频率降低，导致鱼类缺氧死亡。

3.2 丁香酚麻醉锦鲤幼鱼的实用浓度选择

麻醉剂的种类作为影响鱼类麻醉效果的关键因素[21]，加之同一种麻醉剂的麻醉效果也受环境条件、物种及其状态等因素的影响，因此，如何正确选择麻醉剂种类及其使用浓度需考虑多方面因素，在实际应用中首要考虑的是适当的麻醉剂量[22]。水产动物在试验研究(测量、取样等)和生产应用(捕捉、运输等)的过程中应激反应明显，其机体可能会有不同程度的损伤，只有让其处于中度麻醉期才能降低应激反应，从而减少机体损伤，试验研究和生产应用也才能方便进行[20]。在外部环境条件一致的情况下，本文研究丁香酚不同浓度水平麻醉锦鲤幼鱼的作用，试验结果表明：10、 20 mg/L丁香酚浓度组麻醉作用不佳，锦鲤幼鱼只进入A1期(镇静期)或A2期(轻度麻醉期)，而未能进入A3期(中度麻醉期)和A4期(深度麻醉期)；30、40和60 mg/L丁香酚浓度组麻醉作用较好，锦鲤幼鱼均能完整进入不同麻醉分期(A1期、A2期、A3期、A4期)，苏醒时间分别为5.02、5.77和7.40 min，30、40 mg/L浓度组苏醒时间明显短于60 mg/L浓度组；100 mg/L丁香酚浓度组，锦鲤幼鱼也能完整进入不同麻醉分期(A2期、A3期、A4期)，但未能全部复苏，出现死亡。综合考虑麻醉效果、苏醒时间及麻醉剂用量，为节约麻醉成本，在实践操作中建议对体长为(14.16±0.98)cm、体质量为(40.50±1.04)g的锦鲤麻醉采用30～40 mg/L丁香酚，锦鲤幼鱼进入A3期(中度麻醉期)，所需时间为5.22～17.46 min，麻醉作用明显，而将其转置清水中仅历时5.02～5.77 min便可进入R4期(正常期)，苏醒时间短。本文试验结果与张志明等[17]采用丁香酚对锦鲤(体长12～14 cm，体质量30～40 g)麻醉效果的研究结果(麻醉运输适宜质量浓度为15～20 mg/ L)不一致，试验结果丁香酚浓度相差较多，可能是因为一方面锦鲤幼鱼规格不一致，另外一方面试验用锦鲤体质不一样；与李春梅等[18]的研究结果(锦鲤鱼种1.0～2.0 cm，10 mg/L浓度药浴10 min对锦鲤比较合适)不一致，可能是因为锦鲤幼鱼规格不一致。

因此，丁香酚在一定的浓度范围内可使锦鲤幼鱼处于麻醉状态，即适合作为锦鲤幼鱼麻醉剂，这为短期操作中丁香酚对其他水产动物进行麻醉提供了参考。此外，后续有待进一步开展丁香酚作为麻醉剂在不同目的(运输、称重、采卵等)、不同种类和不同规格水产动物等方面的差异试验研究。