斑马鱼是重要的脊椎动物模型，广泛用于研究领域，例如发育生物学，遗传学，毒理学和肿瘤学。它是与鼠，果蝇和线虫一起进行生物学研究的四种模式生物之一。近年来，斑马鱼在免疫学领域的应用逐渐受到重视。斑马鱼具有个体小，易繁殖以及生长周期短，其系统发育和器官组成与哺乳动物具有很大的相似性等优点。斑马鱼仅在生命的第一周具有先天免疫功能，并且特定的体液和细胞免疫反应直到受精后4-6周才发展。变态反应性疾病研究多采用小鼠、大鼠等动物模型，斑马鱼模型仍较少见因此，斑马鱼是阐明先天免疫和适应性免疫的理想动物模型。

斑马鱼饲养条件

仪器为爱生斑马鱼饲养系统，进水处水质采用紫外线24小时不间断式消毒，水温为28~30℃，pH为7.0~7.8，电阻率约为20Ω，光照周期为光照14 h，黑暗10 h。随机分为３组，每缸30尾。3组斑马鱼投喂相同饲料（脱壳丰年虾卵），每日喂食两次，上午10-11时，下午16-17时。使用平底鱼缸进行养殖，水温为25-29℃；PH为7.0-7.8；使用定时开关建立光照周期为光照14h，黑暗10h；溶氧为5-8mg/Ｌ。每日更换新鲜除氯增氧水，每次更换水缸量的1/3，若有斑马鱼死亡，则需全部更换。使用温度计、PH值、亚硝酸盐、氨 氯、溶解氧测定试剂盒对水质状态进行监测，并进行记录。

斑马鱼食物过敏流程

为消除斑马鱼运输过程的影响，将斑马鱼至斑马鱼养殖系统中预养一周，预养期间，使用普通饲料进行喂养，每日喂养两次；在第7天时进行斑马鱼的喂养实验，连续14天进行对照组和实验组的喂养方案，对照组喂养普通饲料，各实验组按照每 20 尾 0.5mg的过敏原刺激量进行喂养，对照组和实验组均每日喂养两次，分别是上午10时和下午16时；激发阶段时间为3日，对照组喂养方案不变，实验组各过敏原的量增加至3倍刺激量进行喂养，在第21天进行空腹取样操作。

斑马鱼食物过敏方案

斑马鱼过敏症状评分标准表

得分&症状

• 0 无任何组织病变，肠绒毛排列整齐；

• 1 肠绒毛排列紊乱，肠道完整性被破坏，局部水肿；

• 2 肠黏膜肌层变厚，固有层松散；

• 3 肠绒毛局部轻微脱落，炎症细胞浸润；

• 4 肠绒毛大量脱落，肠腔局部出现溃疡；

• 5 肠绒毛基本脱落至肠腔，肠腔中分散着肠绒毛碎片。

过敏反应是一种Ⅰ型变态反应，其发生分为致敏阶段和激发阶段，当致敏阶段相同的抗原再次刺激机体时，诱发肥大细胞及嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性物质会造成平滑肌收缩、腺体分泌增加、毛细血管扩张、通透性增加等一系列效应。对斑马鱼脾脏、肝脏和肠道三个器官筛选斑马鱼食物过敏模型的生物标志物从而建立斑马鱼食物过敏模型。通过观察斑马鱼前肠、中肠和后肠的病理结构，杯状细胞和肥大细胞的聚集情况分析斑马鱼受蛋白刺激情况。

参考文献

1、BOYCE J A , ASSA A A , BURKS A W , et al. Guidelines for the diagnosis and management of food allergy in the United States: Summary of the NIAID-Sponsored Expert Panel Report[J]. Nutrition, 2011, 27(2):253-267.

2、KIPS J C, ANDERSON G P, FREDBERG J J, et al. Murine models of asthma[J].European Respiratory Journal, 2003, 22(2):374.

3、ZHOU C , LUDMILA T , SUN N , et al. BALB/c mice can be used to evaluate allergenicity of different food protein extracts[J]. Food and Agricultural Immunology,2016:1-15.

4、李梦洁,刘娜,张曼.斑马鱼变态反应模型的建立与评价[J].标记免疫分析与临床,2022,29(05):841-846.