氯化钠浓度对鲈鲤精子活力的影响

谭中林，邓思红，陈修松，徐大勇，何学福

(1.凉山科华水生态工程有限公司，四川 西昌 615013；2.喜德正源水产有限公司，四川 西昌 615013；3.西昌学院动物科学学院，四川 西昌 615013；4.西南大学生命科学学院，重庆 400000)

鲈鲤(Percocyprispingi)属于鲤形目、鲤科、鲃亚科、鲈鲤属，又名花鱼、青脖、花鲤，在四川境内仅有一种，主要分布于四川的岷江、青衣江、马边河(岷江支流)、金沙江下段、雅砻江、乌江等水系，是四川省珍贵的鱼类之一，也是四川省重点保护的鱼类之一。鲈鲤个体较大，体质量一般为1～3 kg，野外渔获中最大个体质量达到16.5 kg。鲈鲤为肉食性凶猛鱼类，鱼肉口感鲜美，营养丰富，又有很高的药用价值和保健作用，为上等优质食用鱼，具有很高的经济价值。

近几十年来，随着长江上游新一轮水电大开发和水利枢纽工程的修建，鲈鲤的产卵场不复存在，其索饵场也遭到了极大的破坏，再加之其生态环境的日益恶化以及人为的过度捕捞等因素，鲈鲤的资源量急剧下降，濒临绝灭。目前，该种鱼的人工繁殖与增养殖已引起重视，国内学者们已对其某些生物学特性以及养殖技术方面做了大量的工作[1-24]，但关于鲈鲤的精子生理特性未见报道，而研究这种鱼的精子生物学和了解其精子寿命，在理论与生产上均具有一定的意义。为此，本文就氯化钠溶液对精子活力的影响做了初步观察，旨在了解在不同的渗透压条件下鲈鲤精子的生理特性，积累鲈鲤精子的生物学资料。

1 材料与方法

1.1 材料

2012年4月6日，精液取自江河幼鱼经凉山州喜德正源水产有限公司内塘养殖的成熟健康的鲈鲤亲鱼。选取繁殖季节体格健壮、外无损伤、轻挤腹部精液自动流出的成熟雄鱼，鱼体质量2.0～6.0 kg，体长460～550 mm。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制

用氯化钠加蒸馏水配制不同百分比浓度的溶液：0%(蒸馏水)、0.10%、0.20%、0.30%、0.35%、0.40%、0.45%、0.50%、0.55%、0.60%、0.65%、0.70%、0.90%。溶液水温为18.0℃，pH 6.5～7.5。

1.2.2 精液采集

每次取材前先用干布将其生殖孔周围擦干，轻挤鱼腹两侧，精液盛于小培养皿中，加盖待检。要求采集的精液无水、无尿、无血。

1.2.3 精子观察

采用平板载片法，用吸管滴一滴氯化钠溶液在平板载片上，调节好显微镜。然后用解剖针尖蘸取少许精液与氯化钠溶液调匀，立即移至10×10倍显微镜下观察记录其精子活动情况。以精液与溶液接触的瞬间开始启动秒表来计录精子活动的时间，室温为16.4～19.4℃，每个浓度组重复6次。

1.2.4 精子群体运动阶段的划分

精子群体运动阶段的划分参照吴景贵[25]的方法。根据鲈鲤精子在水中的运动状态，可以分为激烈运动、缓慢运动、摇尾运动三个连续的阶段。这三个阶段时间的总和即为精子的寿命。各阶段的具体划分标准如下：

1)激烈运动：自精液与溶液相遇的瞬间开始，在10×10倍镜面下只见到翻动的黑点，看不清精子的形态和运动路线。

2)缓慢运动：精子向前运动，速度较慢，能分清其运动路线。

3)摇尾运动：精子失去前进运动能力，只能在原地做微弱摇尾摆动，直到停止运动而死亡。

以视野中约70%精子由前一运动阶段转为后一运动阶段时，即认为该批精子前一运动阶段的终结和后一运动阶段的开始。摇尾运动阶段的终了，精子运动停止，即90%以上精子都停止活动而死亡。

1.2.5 数据分析

试验数据处理分析采用Excel和SPSS 17.0软件进行统计学分析。

2 结果与分析

不同浓度氯化钠溶液中鲈鲤精子各阶段的持续时间不同，具体详见表1。

表1 鲈鲤精子在不同浓度氯化钠溶液中各个阶段的持续时间

续表1

当氯化钠溶液浓度为0%～0.35%时，鲈鲤精子寿命随氯化钠溶液浓度升高而相对延长。在浓度为0.35%时激烈运动时间和精子寿命最长，分别为(66.33±7.99)s、(635.66±95.78)s。在氯化钠溶液浓度超过0.35%后，精子的活动强度减弱，存活时间缩短。当氯化钠溶液浓度达0.70%时，精子活动受到严重抑制，观察不到被激活的精子。由此可见，氯化钠溶液对鲈鲤精子活力具有影响。

统计学分析显示，当氯化钠溶液浓度为0.35%时，鲈鲤精子的激烈运动时间仅显著高于0.60%组和0.65%组(P<0.05)，而与其余各组之间差异不显著(P>0.05)；当氯化钠溶液浓度为0.35%时，鲈鲤精子的寿命极显著高于其他处理组(P<0.01)；当氯化钠浓度为0.40%时，鲈鲤精子的寿命极显著高于除0.35%处理组外的其余处理组(P<0.01)。

3 讨论

渗透压是影响鱼类精子激活和活力的众多因素中最关键的影响因子[26-27]。一般认为淡水鱼类精子的激活是由低渗环境所致，并且存在精子活动时间最长的最适渗透压[28-29]。体外受精的鱼类精子储存的能量有限，一旦被激活，一般只有几十秒至几分钟就被消耗完。这种精子的短暂运动与精子新陈代谢、细胞的兴奋性和渗透压的调节有关[30]。鲈鲤精子同其他鱼类的精子一样，在精巢中是不活动的，一旦与适合精子活动的溶液接触就会被激活而开始激烈运动，其最具有受精意义的时相是激烈运动阶段。随着本身能源物质的消耗，运动速度逐渐转慢，最后完全失去运动能力，细胞随之死亡、分解。

对于生物来说，决定体液浓度的主要物质是盐分。换句话说，体液的渗透压比较高就是指体液里盐分的浓度比较高。通常淡水中的渗透压非常低，这是因为水中基本没有溶入盐分，所以淡水鱼类体液的盐分浓度一般比外界水环境要高些，系高渗性溶液，而淡水本身则接近于零。当鲈鲤的精子接触淡水后势必消耗大量的能量来抵抗外界水的渗入，这就加快了其精子的死亡。在淡水中添加氯化钠，则可以提高溶液的渗透压，使其尽可能接近鲈鲤精子本身的渗透压，进而延长精子寿命，提高受精率。从上述分析比较可以得出：当氯化钠溶液浓度为0.35%时，鲈鲤精子激烈运动时间和寿命最长，因而在生产实践中配制鲈鲤精子激活剂时，0.35%氯化钠溶液可作为参考值，以延长精子活力，保持精子的激烈运动状态。同时，当氯化钠溶液浓度为0.35%时，鲈鲤精子激烈运动时间虽然最长，但除与0.60%和0.65%差异显著外，和其他处理组均差异均不显著，参考邓岳松等关于鱼类精子活力的研究进展，体外受精鱼类的精子活力不仅与自身质量有关，还受到pH、渗透压、温度及离子等因子的调节和影响[31]，究竟哪种因子能够显著影响鲈鲤精子活力尤其是激烈运动状态，有待进一步研究。Morisawa等[32]在研究鲤(Cyprinuscarpio)、鲫(Carassiusauratus)、欧鲫(Carassiuscarassius)和两种雅罗鱼(Leuciscus)精子活动中指出，鲤科鱼类精子在与其精浆等渗的电解质(NaCl或KCl)或非电解质(甘露糖或葡萄糖)溶液中是不活动的，精浆的渗透压浓度是抑制精子活动的因子。当氯化钠溶液浓度大于0.70%时，鲈鲤精子不活动，由此推测与鲈鲤精浆等渗的氯化钠浓度为0.70%，故该结果可作为鲈鲤精子保存液的参考值。